میکروبیولوژی و گرایشات آن را می توان پایه و اساس بسیاری از علوم در نظر گرفت. علومی مانند بیوشیمی ، بیوتکنولوژی ، ژنتیک و پزشکی که تمام موارد ذکر شده در تشخیص بیماری ها نقش مهمی دارند. هدف علم میکروبیولوژی شناسایی جانداران میکروسکوپی و بررسی زندگی آنهاست. علوم سلولی در واقع فعالیت های درونی میکروب ها را بررسی می کنند و میکروبیولوژی را مادر علوم سلولی در نظر می گیرند.

دانشمند ایتالیایی با نام گیرولامو فراکاستورو Girolamo Fracastoro نخستین کسی بود که به موجودات میکروسکوپی اندیشید. وی تصور می کرد بیماری ها واگیردار هستند.

گرچه میکروسکوپ در سال ۱۶۰۹ توسط زاخاریاس یانسن کشف شد، اما در حقیقت پایه دانش میکروب شناسی در قرن ۱۷ میلادی اتفاق افتاد، زمانی که یک بازرگان پارچهٔ هلندی به نام آنتونی فان لیوون هوک با میکروسکوپ اختراعی خود، ابتدا الیاف پارچه ها و پس از آن موجودات و ذرات ریز را در قطره آب برکه مشاهده کرد. هوک حتی گلبول قرمز را هم توانست مشاهده کند.

اواخر قرن ۱۷ بود که نظریه تولید خودبخودی مطرح و مورد بحث قرار گرفت. قرن 17 زمانی بود که بسیاری از دانشمندان از جمله فرانسیکو ردی Francesco Redi، تصور می کردند میکرو ارگانیسم ها تشکیل شده از مواد غیر زنده هستند.

در سال ۱۷۶۶ اسپالانزانی Lazzaro Spallanzani به این نتیجه رسید که میکروب ها از هوای غیر استریل و ناپاک وارد محلول های غذایی شده و آن ها را فاسد می کنند.

علوم میکروبیولوژی چیست و گرایشات آن کدام است؟

میکروبیولوژی به 3 گرایش پزشکی،غذایی و صنعتی طبقه بندی می شود:

گرایش پزشکی:

در گرایش پزشکی میکروبهای بیماری زا برای انسان و چگونگی فعالیت آنها بررسی می شوند. گرایش پزشکی تنها بخش کوچکی از علم میکروبیولوژی را تشکیل می دهد، چرا که از بین تمام میکروبهای شناخته شده تنها حدود ۱۷۰ نوع میکروب، بیماری زا هستند و بقیه میکروبها، انواع مفیدی محسوب می شوند.

میکروبیولوژی غذایی:

بسیاری از مواد غذایی مانند ماست یا پنیر به کمک میکروبهای مفید تولید می شوند.

میکروبیولوژی صنعتی:

در گرایش میکروبیولوژی صنعتی از میکروبهای مفید برای تولید مواد صنعتی مانند اسیدها و کمپوست میکروبی (تهیه کود به یاری مواد زاید و زباله ها) استفاده می شود.

به علاوه رفع آلودگی های محیط زیست نیز به کمک میکروب ها انجام می شود.

درصورت علاقمندی میتوانید با مراجعه به صفحه میکروب شناسی و گرایشات آن از اطلاعات بیشتری بهره مند گردید. میکروبیولوژی و گرایشات آن شامل رنگ آمیزی باکتری نیز می شود:

رنگ آمیزی در باکتری شناسی برای بررسی و شناخت میکرو ارگانیسم ها استفاده می شود و یکی از مشخصات مهم باکتری ها که به شناسایی و شناخت آن ها کمک می کند، رنگ پذیری آن ها است که با طیف گسترده از رنگ ها امکان پذیر است و توجه شود که در حالت عادی باکتری ها بی رنگ هستند و به همین خاطر یکی از اصلی ترین روش های شناسایی باکتری استفاده از رنگ ها است.

نمونه هایی از رنگ آمیزی عبارتند از:

1) رنگ آمیزی گرانول در باکتری

2) رنگ آمیزی فلاژل یا تاژک

3) رنگ آمیزی کپسول در باکتری

4) رنگ آمیزی اسپور و هم چنین رنگ زدایی از آن 

(( اسپور شکل خفته باکتری شکلی مقاوم از یک باکتری است که در شرایطی مانند گرما ، کاهش رطوبت ، خشکی ، کمبود مواد غذایی ،برخورد با عوامل فیزیکی و شیمیایی پایدار می ماند, و به این شکل از باکتری اسپور یا اندوسپور ( زیرا در داخل سلول رویشی باکتری تشکیل می شود) می گویند.

هر باکتری فقط دارای یک اسپور است و هر اسپور فقط تبدیل به یک باکتری می شود. هم چنین محل تشکیل اسپور, محلی مشخص است که می توان از روی تشکیل محل آن , نوع باکتری را شناسایی کرد برای مثال :

• بعضی از باکتری ها در وسط اسپور دارند که به آن ها centeral   می گویند مانند  باسیلوس سرئوس.
• بعضی از باکتری ها نزدیک به انتها اسپور دارند که به آن ها subterminal می گویند مانند باسیلوس سوبتیلیس.
• بعضی از باکتری ها در انتها اسپور دارند که به آن ها terminal  می گویند. مانند کلستریدیوم تتانی.
• توجه شود که اسپور(شکل خفته باکتری) به دو صورت اندوسپور و اگزوسپور وجود دارد.))

دستگاه ها و مواد متفاوتی در علم میکروبیولوژی مورد استفاده قرار می گیرند، از جمله:

اتوکلاو، انکوباتور، آون یا فور، بن ماری، کلنی کانتر، میکروسکوپ، ماشین های شستشو ، سانتریفیوژ و محیط کشت میکروبی

برای اطلاعات بیشتر در مورد  علم میکروبیولوژی لطفا  از سایت انجمن میکروب شناسی آمریکا  دیدن فرمایید.

در ادامه هر یک از این دستگاه ها و مواد  به طور مجزا توضیح داده شده, همچنین میتوانید با کلیک بر روی کلمات نارنجی رنگ این مقاله  از قیمت آنها مطلع شوید. هلدینگ KTG ارائه دهنده ی انواع دستگاه های مورد نیاز آزمایشگاه هاو صنایع مختلف می باشد.

گروه K.T.G با هدف تضمین کیفی و رضایتمندی مشتریان، کالاهای مورد درخواست را از کمپانی های معتبر داخلی و همچنین کشور های اروپایی، آمریکایی و آسیایی بر اساس استاندارد مورد تایید و کیفیت بالا ، تهیه و ارائه می دهد.

به علاوه تعمیر و کالیبراسیون تجهیزات آزمایشگاهی خود را به متخصصین و کارشناسان ما بسپارید. همه ی محصولات دارای یک سال ضمانت و 10 سال خدمات پس از فروش می باشند.

برای مشاوره و اطلاعات بیشتر لطفا با کارشناسان ما در تماس باشید.

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: علوم میکروبیولوژی چیست ؟

کشاورزی و جنگلداری با پیشرفت فناوری دیجیتال، صنعت سنتی گذشته

با سرعت چشمگیری در حال تبدیل شدن به صنعتی هوشمند است.

این مسئله باعث ایجاد انقلابی دیگر در صنعت، با عنوان انقلاب صنعتی چهارم (Industry 4.0) شده است.

تأثیرات صنعت چهارم از لحاظ اقتصادی، اجتماعی و محیط زیست، در سراسر دنیا چشمگیر خواهد بود.

در حال حاضر این تحول به لطف علومی مانند هوش مصنوعی (Artificial Intelligence) و اینترنت اشیاء (IoT)

با سرعت خیره کننده ای در حال توسعه است.

به طوری که با پیشرفت های اخیر حوزه دیجیتال، بیان شده است که

نقطه تکنیکی فناوری (Technological singularity) خیلی زودتر از آنچه انتظار می رود اتفاق خواهد افتاد (Singh et al., 2020).

با توجه به مزایای اقتصادی و محیط زیستی صنعت چهارم، ردپای این تحول در صنعت جنگل داری نیز دیده شده است که

محققان از آن با عنوان جنگل داری چهارم (Forestry 4.0) تعبیر می کنند،

ولی به دلایل مختلفی استفاده و توسعه فناوری در جنگل کندتر از سایر بخش های صنعتی پیش می رود.

از جمله این علل عبارتند از:

جنگل ها در بیشتر کشورها، جزو اراضی ملی بوده و بیشتر درگیر سیاست های غلط،

یا محافظه کارانه دولت ها قرار می گیرند،

دسترسی به بسیاری از مناطق جنگلی به دلیل صعب العبور بودن و وسعت، سخت و دشوار است و

نیاز به تجهیزات خاص و ویژه برای داده برداری خواهد داشت.

تاریخچه طرح های جنگلداری ایران

در گذشته های دور و قبل از ملی شدن، جنگل های ایران متعلق به مالکان بوده و

از آن به عنوان مراتع استفاده می کردند و هر گونه بهره برداری در اختیار مالکان بود.

و احتمالاً اگر پیمانکاری قصد بهره برداری داشت، باید حق بهره برداری یا حق مالکانه را به مالکان بپردازد.

و چون سازمان جنگل ها به صروت امروزی وجود نداشت، فقط یکی دایره جنگل در وزارت  فلاحت آن روز و

بعدها در وزارت کشاورزی وجود داشت که پروانه بهره برداری صادر می کرد و

مبلغی به عنوان حق دولت اخذ می شد.

این دایره جنگل در یک اتاق محقر در وزارتخانه وجود داشت که به همت شادروان استاد کریم ساعی

به بنگاه جنگل ها تبدیل گردید.

کشاورزی و جنگلداری

قسمتی از جنگل های شمال ایران توسط دولت برای تراورس راه آهن بهره برداری می گردید که

روش بهره برداری آن بر مبنای تک گزینی بود و چوب مورد مصرف معادن ذغال سنگ نیز از جنگل ها برداشت می شد.

و برای مصرف معادن کوره های ذغال در شمال وجود داشت که نتایج آن تخریب جنگل های شمال را در بر داشت.

بهره برداری از درختان گردو، شمشاد و بلوط جهت صادرات بدون در نظر گرفتن مسائل فنی و علمی ادامه داشت.

در آن زمان طرح های جنگلداری مدون وجود نداشت و آن تاریخ مصادف با مأموریت شریک اتریشی

مستشار خارجی در ایران بود که نامبرده به عنوان مدرس استخدام شده بود و

آرامگاه محقر او در باغ دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی کرج می باشد.

سپس به همت شادروان استاد کریم ساعی و با همکاری شادروان مهندس غلام علی بنان

کلاس بازآموزی برای تعدادی از مهندسان دایر گردید.

کشاورزی و جنگلداری

مهندس جوان آن روز و مردان فنی و توانای امروز تا آنجا که حافظه نگارنده یاری می کند، عبارت بودند از:

مهندس رضا صدقیانی، مهندس رشدیه، مهندس خاوری، مهندس مشتاق، استاد دکتر جزیره ای،

مهندس کاظمی، مهندس ابراهیمی، مهندس هنگ آفرین، مهندس داداش زاده، مهندس کشت بد، دکتر قریب،

مهندس نصر، مهندس توکلی، مهندس خردپیر و چندین نفر دیگر که مسئولان طرح های جنگلداری شدند.

اولین طرح جنگلداری علمی در ایران توسط مهندس ژاپنی فرانسوی مستشار سازمان خوار وبار کشاورزی جهانی طراحی شد

که به نام طریقه دانگ واحد نامیده می شد و استاد دکتر عزیز اصلی در آن زمان همکاری آن را به عهده داشت.

سپس در سال 1336 طرح جنگلداری لاجیم از توابع سوادکوه جهانی با دستیاری دکتر عزیزی اصلی پیاده شد که

شاگردان آن روز مهندسان جوانی بودند که تعدادی از آنها عبارتند از:

مهندس زنگنه، مهندس فتحی، مهندس شیدائی، مهندس قاسم زاده، مهندس پریور، مهندس امامی،

مهندس مقدم، مهندس صفری زاده، مهندس پورسعادت و چند نفر دیگر که هر کدام مسئول طرح های جنگلداری گردیدند.

در سال 1337 مهندس ظهرالدین پاکستانی مستشار سازمان خوار وبار کشاورزی جهانی

طرح جنگلداری ماشلک از توابع نوشهر را پی ریزی کرد که توفیقی در برداشت.

در سال 1336 مهندس خنک پاکستانی مستشار سازمان خوارو بار کشاورزی جهانی و

معلم جنگلداری آموزشگاه جنگل گرگان چند طرح جنگلداری را برای محصلان پی ریزی کرد.

در سال 1337 پروفسور هانس گلایزر آلمانی مستشار سازمان خوارو بار کشاورزی و جهانی با دستیار دکتر نصرت الله ساریخانی

طرح جنگلداری لوه از توابع گنبد را طراحی کردند.

کشاورزی و جنگلداری

موج دوم پایه ریزی طرح های جنگلداری از سال 1343 آغاز گردید.

که مصادف با احداث انیستیتو جنگل و مرتع و بعدها دانشکده منابع طبیعی می باشد که

به همت استاد دکتر رضا حجازی به وجود امد و در بین مستشاران سازمان خوارو بار کشاورزی جهانی

استاد توانایی به نام پروفسور هرمان اتر با کمک استاد دکتر عزیز اصلی علاوه بر تدریس درس جنگلداری

پایه گذار طرح جنگلداری در جنگل تحقیقاتی خیرودکنار در شمال ایران بودند که

امروز این مرکز به نام قدیمی ترین مرکز علمی جنگلی در شمال ایران به نام جنگل تحقیقاتی دانشکده منابع طبیعی کرج وجود دارد.

در همین سال ها طرح های جنگلداری متعددی در جنگل های مازندران توسط مستشاران رومانی به نام طرح های جنگل نکا پی ریز شد و

طرح های دیگری به نام طرح جنگلداری سنگده در مازندران توسط پروفسور یدتیالکف با دستیاری دکتر منوچهر امانی برقرار گردید.

سپس ده ها طرح جنگلداری توسط فارغ التحصیلان آموزشگاه سابق گرگان و دانشکده منابع طبیعی کرج

در تمام ایران تهیه شد که اغلب آنها ارزش علمی زیادی دارند.

اولین مدرس طرح جنگلداری در ایران شادروان مهندس غلام علی بنان بود که

در گروه جنگل دانشکده کشاورزی کرج تدریس را آغاز کرد و نگارنده افتخار شاگردی ایشان را داشته است.

ولی تحول تدریس از زمانی آغاز شد که گروه جنگل به دانشکده منابع طبیعی تبدیل گردید و

پروفسور هرمان اتر با همکاری استاد دکتر عزیزاصلی مسئولیت را بر عهده گرفتند.

سپس استاد دکتر عزیزاصلی سال ها مستقلاً عهده دار تدریس جنگلداری بودند و

امروز سه استاد توانا و باتجربه به دکتر محمود ذبیری، دکتر باریس محبوبیان، دکتر منوچهر نمیرانیان

همراه همکارانی همانند دکتر جهانگیر فقهی، دکتر درویش صفت و دکتر وحید اعتماد مسئولیت های علمی و

عملی جنگلداری به خصوص عملیات تابستانه جنگل خیرودکنار را عهده دار هستند.

ضمناً در اغلب دانشکده های منابع طبیعی کشور اساتیدی دیگری عهده دار تدریس و تهیه طرح های جنگلداری می باشند.

هم چنین مؤسسه تحقیقات جنگل ها و مراتع خود نیز صاحب طرح ها جنگلداری است که

با اصول علمی و فنی اداره می شود ده ها طرح جنگلداری در جنگل های خارج از شمال

توسط سازمان جنگل ها و مراتع  تهیه شده که قابل ذکر است.

در گذشته طرح های جنگلداری در ایران یک منظوره بوده و فقط بهره برداری چوب صنعتی مورد نظر بوده است.

تا این که طرح های چندجانبه و یا چندمنظوره مطرح گردید و نظرات اقتصادی و اجتماعی به انها اضافه شد.

با ایجاد کارخانه چوب بری اسالم در گیلان از جنگل های طالش مورد بهره برداری صورت گرفت که

در ابتدا توسط گروه کانادائی پایه ریزی شده بود.

و برداشت جنگل با کمال تأسف به طریق برش یکسره صورت می گرفت که

مورد اعتراض دانشکده منابع طبیعی کرج قرار گرفت و این طریقه بهره برداری متوقف شد.

سال ها طرح های جنگلداری در ایران به روش تدریجی یا پنهانی صورت می گرفت .

با این طریق در مدت 25 سال به نام دوره تجدید نسل با 5 برش و هر برش به فاصله 5 سال به نام های:

1- برش تهیه یا آمادگی
2- برش بذرافشانی
3- اولین برش دومی
4- دومین برش دومی
5- برش نهائی

بهره برداری انجام می شد و نظر این که جنگل های راش شمالی ایران کهنسال بوده و

اغلب درختان از بین بهره برداران گذشته بودند و جاده های جنگلی به صورت امروزی وجود نداشت و

این روش در تمام اروپا معمول بود بنا بر توصیه پروفسور تره گوبو مستشار سازمان ملل متحد

روش تدریجی یا پنهانی به مرحله عمل درآمد تا این که روش جدید جنگل شناسی

همگام با طبیعت که مدتی است در اروپا معمول شده بنا بر توصیه استاد دکتر محمدرضا مروی مهاجر

از طرفداران آن روش برای جنگل تحقیقاتی دانشکده منابع طبیعی کرج در جنگل خیرودکنار از توابع نوشهر معمول گردید و

دانشکده منابع طبیعی از این روش جدید حمایت می کند.

تبصره:

جا دارد سازمان جنگل ها و مراتع با کمک سازمان حفاظت محیط زیست در 9 منطقه از جنگل های شمال ایران:

منطقه ساحلی، منطقه میان بند، منطقه کوهستانی در سه استان گیلان، مازندران، گلستان (گرگان)،

مناطقی را برای بررسی تنوع زیستی در نظر بگیرد و انها را بر مبنای اکوسیستم جنگل

همراه تعیین توان اکولوژی با استفاده از G.I.S و داده های کامپیوتری بر پایه سنجش از راه دور  Forestry Modeling

با محاسبهCarring Capacity (ظرفیت برد) بررسی کند،

ضمناً طرح های جنگلداری آینده را بر پایه توسعه پایدار قرار دهد و برداشت سالانه از جنگل ها را در ایران

به یک سوم ظرفیت تقلیل دهد تا جنگل ها که در گذشته به صورت بی رویه بهره برداری شدند در آینده ترمیم گردند و

سالانه 100 ها هکتار جنگل کاری نماید تا بعد از 100 سال که 10 میلیون هکتار جنگل حاصل شد

به عدد طلائی 18 میلیون هکتار جنگل برآورد شادروان استاد کریم ساعی بانی جنگلبانی نوین ایران برسیم.

لطفا جهت اخذ مشاوره و استعلام قیمت با کارشناسان ما تماس حاصل بفرمایید.

شماره های تماس عبارتند از:

021-44276021

021-44276022

021-44276023

021-44276024

021-44276025

0912-1223103 (مشاور فنی)

0902-4809888 (بخش بازرگانی - پیام در واتساپ)

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: کشاورزی و جنگلداری

رنگ آمیزی گرانول در باکتری اولین بار توسط آقایان ارنست و بیب ابداع شد. باکتری ها در زمانی که امکان متابولیسم فراهم باشد ولی قادر به تکثیر نباشند , شروع به ذخیره سازی بعضی از مواد به ضورت گرانول در سیتوپلاسم می کند که اغلب گرانول ها در شرایط اسیدی ذخیره می شوند.

گرانول ها در سیتوپلاسم محلول باکتری ها ، به صورت پلیمر هایی با وزن مولکولی زیاد, به منظور ذخیره سازی مواد غذایی ایجاد می شوند. البته توجه شود که برای شناسایی باکتری ها می توان از گرانول های موجود در آن استفاده کرد.

انواع گرانول ها :

گرانول ها انواع مختلفی دارند که مهم ترین آن ها عبارت اند از :

 1 . گرانول های پلی هیدروکسی بوتیرات یا چربی  :

اگر در محیط زندگی باکتری ، نیتروژن ، گوگرد و فسفر کم باشد و از کربن به عنوان منبع انرژی استفاده شود, این ذرات به صورت گرانول ذخیره می شوند. گرانول های پلی هیدروکسی بوتیرات هم چنین دارای ذرات چربی هم هستند و یکی از ذخایر سیتوپلاسمی که حاوی پلیمر های لیپیدی می باشد ، گرانول های پلی هیدروکسی بوتیریک اسید می باشد

و این گرانول ها زمانی ایجاد می شود که باکتری از نظر منبع کربن غنی ولی از نظر منبع ازت فقیر باشد. این گرانول ها را می توان در باکتری هایی مانند ازتوباکتر ، باسیلوس ، سودوموناس و برخی از آرکی ها دید. گرانول های بتا هیدروکسی بوتیرات عمدتا در باسیلوس ها دیده می شود. ( هم چنین در سودوموناس ها) رنگ آمیزی مربوط به آن ها رنگ آمیزی سودان بلک یا روش Burddeb  می باشد. که گرانول ها به رنگ سیاه در می آیند.

رنگ آمیزی گرانول های چربی به روش سودان سیاه :  

1. تهیه گسترش
2. خشک نمودن گسترش
3. فیکس کردن
4.  اضافه نمودن رنگ سودان سیاه به مدت 10 دقیقه
5.  شستشو با آب
6.  خشک کردن
7.  اضافه نمودن گزیلول به مدت 20 ثانیه
8.  خشک کردن با کاغذ صافی اضافه نمودن محلول سافرانین پنج درصد به مدت 10 تا 15 ثانیه
9. شستشو با آب و خشک نمودن در مجاورت هوا ، اضافه نمودن روغن ایمرسیون و مشاهده با لنز 100

نتیجه گیری : باکتری ها به رنگ قرمز و گرانول های پلی هیدروکسی بوتیرات در داخل سیتوپلاسم باکتری به رنگ قهوه ای تا سیاه دیده می شود.

2 . گرانول های گلیکوژنی :

هرگاه در محیط زندگی باکتری کربن به مقدار کافی وجود داشته باشد ، این کربن اضافه را به صورت گلیکوژن یا نشاسته ذخیره می کند. هم چنین گرانول های گلیکوژنی به همراه گرانول های پلی هیدروکسی بوتیرات در ساخت پروتئین ها و اسید نوکلئیک به کار می رود.

گرانول های گلیکوژنی و نشاسته ای عمدتا در باسیل های روده ای(انتروباکتریاسه ها ) دیده می شود و برای تشخیص آن ها از رنگ آمیزی با ید ( لوگول یدین ) می توان استفاده کرد. ترکیب ید گلیکوژن دارای رنگ قهوه ای و ترکیب ید و نشاسته دارای رنگ بنفش است.

رنگ آمیزی لوگول برای تشخیص نشاسته به کار می رود که به رنگ آبی تیره یا بنفش در می آید. هم چنین برای مشخص کردن هسته سلول ، بی حرکت کردن تاژکداران و .... استفاده می شود.

 3 . گرانول های متاکروماتیک یا ولوتین :

ترکیبات دانه های متاکروماتیک شامل لیپید ، پروتئین ، اسید نوکلئوتیک و پلی  فسفات می باشد و برای رنگ آمیزی آن از روش باب ارنست ، ولوتین و آلبرت و نایسر استفاده می شود. بیشتر پلی  فسفات ها به صورت گرانول های متاکروماتیک دیده می شود, (از این جهت متاکروماتیک می گویند که رنگ آمیزی قرمز ، گرانول ها را آبی می کند.)

کلمه ی متاکروماتیک از کلمه ی متاکرومازی به معنی تغییر رنگ گرفته شده است. گرانول های متاکروماتیکی میل زیادی برای ترکیب شدن با رنگ های بازی دارند. در بیشتر انواع باکتری ها گرانول های متاکروماتیک وجود دارد اما بیشتر در جنس کورینه مایکوباکتریوم است که شامل باکتری مولد دیفتری ( کورینه باکتریوم دیفتریه ) دیده می شود.

( البته در بضی از مخمر ها و پروتوزوئر های گیاهی نیز دیده می شود.)  برای مشاهده ی گرانول های متاکروماتیک از رنگ آمیزی آلبرت و نایسر استفاده می شود. توجه شود که گرانول های متاکروماتیک به الکل و اسید کمی مقاوم بوده  و در مقابل رنگ بری با اسید سولفوریک یک درصد مقاومت دارند.

رنگ آمیزی به روش نایسر در گرانول های متاکروماتیک :  

1.  تهیه گسترش
2. خشک کردن گسترش
3. فیکس کردن با حرارت
4. اضافه نمودن رنگ نایسر به گسترش به مدت 30 ثانیه
5.  شستشو با آب
6.  خشک کردن
7.  اضافه نمودن محلول 2 درصد بیسمارک به گسترش  به مدت 30 ثانیه
8. خشک کردن در مجاورت هوا و اضافه نمودن روغن ایمرسیون و مشاهده نمونه زیر میکروسکوپ با لنز 100

نتیجه گیری : در رنگ آمیزی نایسر به روش متاکروماتیک گرانول های متاکروماتیک به رنگ آبی تیره یا بنفش و سیتوپلاسم باکتری به رنگ سبز دیده می شود. اما در رنگ آمیزی آلبرت گرانول های متاکروماتیک به رنگ آبی تیره و سیتوپلاسم باکتری به رنگ قهوه ای روشن مشاهده می شود.

 4 . گرانول های سولفور :

گرانول های سولفور که به عنوان منبع الکترون در فتوتروف و منبع انرژی در لیتوتروف ها به کار می رود.

 5 . گرانول های کربوکسی زوم :

گرانول هایی هستند که حاوی آنزیم کلیدی چرخه تثبیت کربن ( ریبولوز بی فسفات کربوکسیلاز) در باکتری های اتوتروف است.

گرانول های پلی متا فسفات :

اسکلت اصلی آن فسفر است و در ساخت اسید نوکلئوئیک و فسفو لیپید کاربرد دارد و از ویژگی های کورینه باکتریوم ها می باشد. باکتری های دارای این گرانول در دو قطب خود بهتر رنگ می گیرند. البته پلی متا فسفات در مایکوباکتریوم ها ، اشرشیای کلای ، انتروباکتریاسه ، سودوموناس آئروژینوزا ، یرسینیا و گاردنلا واژینالیس هم دیده می شود.

برای اطلاع از  سایر محیط کشت های میکروبی  و همچنین قیمت محیط کشتها, لطفا مطلب محیط کشت کیولب را مطالعه نمایید.

برای بدست آوردن اطلاعات بیشتر در مورد قیمت محیط کشت  به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید.

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت ها ی میکروبی و سلولی با نازل ترین قیمت ها از معتبرترین کمپانی ها هستید

منبع:  هلدینگ KTG

مقاله : رنگ آمیزی گرانول در باکتری

رنگ آمیزی کپسول در باکتری از جایی نشات میگیرد که برخی از باکتری های گرم مثبت و گرم منفی ماده ژله مانندی ترشح می کنند که در خارج آن متمرکز شده و دیواره باکتری را می پوشانند و تحت عنوان کپسول شناخته می شود. کپسول مانع از خشک شدن باکتری می شود. ( به دلیل این که پلی ساکارید های خارجی میزان بالایی از آب جذب می کند.)

همچنین در بیماری زایی آن نقش دارد برای مثال نقش کپسول در بیماری زایی ، می توان به بیماری زایی استرپتوکوکوس پونومونیه اشاره کرد به طوری که اگر توانایی تولید کپسول از بین برود ، این باکتری غیر بیماری زا می شود.

کپسول باکتری

برخی از باکتری ها ماده لزجی ترشح می کنند که در خارج آن متمرکز شده و دیواره باکتری را می پوشاند که  کپسول نامیده می شود .کپسول ساختمان متراکم و مشخصی دارد که با رنگ آمیزی مخصوص می توان آن را در اطراف  باکتری مشاهده نمود.

هنگامی که پلیمر خارج سلولی به صورت متراکم و دارای حدود واضح و مشخص باشد آن را کپسول می نامند و در مواقعی که ماده مذکور متراکم نبود و به صورت الیاف در هم و تا حدودی گسسته از فیبریل های خارج سلولی  تشکیل شده باشد، گلیکوکالیکس ) Glycocalix   ) نامیده می شود

در برخی باکتری ها مقادیر زیادی از ماده مذکور ساخته می شود که ظاهرا از سلول جدا می شود و  به نظر می رسد که باکتری در این مواد فرو رفته که در این حالتچنین موادی را قشر لعابیSlime Layer)  ) می نامند. کپسول در قدرت تهاجمی باکتری موثر است و عملکرد خود را از طریق ممانعت از فاگوسیتوز انجام می دهند.

کلنی باکتری های دارای کپسول به شکل موکوئیدی یا مخاطی (M شکل) مهم ترین عملکرد کپسول خاصیت ضد فاگوسیتوزی آن می باشد. همچنین کپسول می تواند به عنوان مخزن ذخیره مواد غذایی یا دفع مواد زائد هم عمل کند.

پلیمر های کپسول خاصیت آنتی ژنتی دارند و در برخی از باکتری ها تحت عنوان آنتی ژن k  برای تعیین سروتیپ ها استفاده می شود. کپسول ها نقش حافظتی در باکتری دارد و همچنین به عنوان یک سد اسمزی بین باکتری و محیط اطراف آن عمل می کند.

جنس کپسول عمدتا از پلیمر های پلی ساکاریدی است اما استثنا هایی هم دارند :

1 . باسیلوس آنتراسیس و باسیلوس لیکنی فورمیس که از جنس گلوتامات _ D ( پروتئین ) است.

2 . یرسینیا پستیس ( عامل طاعون ) دارای کپسول گلیکو لیپو پروتئینی است و پروتئین هایی شاخص وجود دارد.

3 . کپسول استرپتوکوک گروه A از جنس اسید هیالورونیک است.

4 . استنوباکتر گزیلینوم از جنس سولز است.

کپسول به یکی از سه شکل زیر دیده می شود :

1.کپسول

2 .لایه لعابی (گلیکوکالیکس یا Slime layer   یا بیوفیلم )

3 . میکرو کپسول

تفاوت این سه شکل در ضخامت و تراکم آن ها می باشد.

عملکرد کپسول :  

1 . ضد فاگوسیتوز ( مهم ترین عملکرد)

2 . ضد کمپلمان

3 . اتصال باکتری

4 . ممانعت از دهیدراتاسیون باکتری  یا خشک شدن باکتری

رنگ آمیزی کپسول در باکتری

به طور کلی رنگ آمیزی کپسول مشکل می باشد و مواد کپسول محلول در آب بوده و ممکن است به وسیله ی شست وشو از بین برود و همچنین حرارت نیز باعث تخریب ساختار کپسول و در نهایت از بین رفتن ساختار کپسول می شود .

در نتیجه فیکس کردن گسترش در رنگ آمیزی کپسول صورت نمی گیرد . همچنین دقت شود در هنگام پخش کردن باکتری روی لام باید از هم زدن زیاد آن توسط لوپ اجتناب نموده زیرا که باعث متلاشی شدن کپسول می گردد.

کپسول متراکم است و دارای ضخامت بوده و حدود مشخصی داشته و  با رنگ آمیزی های مثبت و منفی  قابل مشاهده می شود. رنگ آمیزی هایی که کپسول در آن ها رنگ می گیرند رنگ آمیزی مثبت و رنگ آمیزی هایی که کپسول در آن بی رنگ بوده و باکتری رنگ می گیرد رنگ آمیزی منفی هستند. رنگ آمیزی منفی یعنی به کمک مرکب چین یا نگروزین قابل مشاهده است.

 رنگ آمیزی منفی دو نوع است :

1 . Burri  ( روش خشک )

2 . Fleming  (روش مرطوب )

رنگ آمیزی های مثبت شامل : Hiss  ، Anton  ، Muire  ، Gine  ، Macneal  می باشد

رنگ آمیزی به روش نیگروزین یا منفی :

در این رنگ آمیزی زمینه گسترش رنگ منفی را می گیرد و رنگ وارد باکتری نمی شود و کپسول باکتری بدون رنگ می ماند و به صورت هاله ای شفاف در اطراف باکتری و در یک زمینه تاریک مشاهده می شود.

روش کار :

1 . یک یا دو لوپ از باکتری را روی لبه کناری لام قرار دهید.

2 . یک قطره معرف نیگروزین یا جوهر هندی یا ائوزین را به آن اضافه کرده و

با یک لام تمیز دیگر با زاویه 30 درجه روی رنگ قرار داده و تا انتهای دیگر لام کشیده تا گسترش تهیه گردد.

رنگ آمیزی به روش ولش :

رنگ آمیزی ولش نوعی رنگ آمیزی منفی است که شامل قرار دادن محلول کریستال ویوله داغ سپس آب کشی با محلول سولفات مس است. ماده دوم برای برطرف کردن رنگ اضافی به کار می رود زیرا شستشوی نمونه با آب کپسول را حل می کند.

نمک مس به پس زمینه نیز رنگ می دهد نتیجه آن که باکتری و پس زمینه اش آبی تیره و کپسول آبی ، کم رنگ دیده می شود. برای بهتر تولید شدن کپسول از محیط مغذی تریپتوز فسفات جهت باکتری استفاده می کنیم.

برای اطلاع از  سایر محیط کشت های میکروبی  و همچنین قیمت محیط کشتها, لطفا مطلب محیط کشت کیولب را مطالعه نمایید. برای بدست آوردن اطلاعات بیشتر در مورد قیمت محیط کشت  به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید.

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت ها ی میکروبی و سلولی با نازل ترین قیمت ها از معتبرترین کمپانی ها هستید با کارشناسان شرکت کیمیا طب گستر تماس حاصل فرمایید.

شماره های تماس عبارتند از:

44276021 021

44276022 021

44276023 021

44276024 021

44276025 021

0912-1223103

0902-4809888 (بخش بازرگانی - پیام در واتساپ)

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: رنگ آمیزی کپسول در باکتری

رنگ آمیزی فلاژل یا تاژک ساختاری مارپیچ چپ گرد است که از واحد های پروتئینی به نام فلاژلین تشکیل شده است. تاژک به باکتری اجازه حرکت به سمت مواد غذایی در محیط را می دهد و از مواد مضر دور می شود. تاژک ساختمان مارپیچی سختی دارد که طول آن حدود 10 میکرون و ضخامت کمی دارد که قطر آن به 2/0 میکرون می رسد. ( به همین علت است که به آسانی نمی توان آن را زیر میکروسکوپ نوری دید.)

تاژک به آنتی ژن H نیز معروف است. آنتی ژن H آنتی ژن حساس به حرارت می باشد. اختلاف این آنتی ژن در باکتری ها به تفاوت اسید های آمینه موجود در آن مربوط است. هم چنین هر باکتری فقط یک نوع فلاژل دارد.

( البته تنها باکتری ای که دارای دو نوع فلاژل می باشد کائولو باکتر است که به دلیل شکل خاصش به این نام می نامند.) باکتری های متحرک که دارای  فلاژل هستند به صورت Rotating  یا چرخان عمل می کند.

انرژی مورد نیاز برای چرخش فلاژل از طریق پمپ پروتون یا pmf تامین می گردد. نکته ی بسیار حائز اهمیت این است که اگر باکتری در محیط حاوی گلوکز رشد پیدا کند, هیچ موقع فلاژل را نمی سازد که دلیل آن مهار نسخه برداری به علت کاهش amp  وجود دارد. توجه شود که هم پیلی باکتری و هم تاژک باکتری از غشای سیتوپلاسمی نشات می گیرند.

اعمال تاژک :

حرکت باکتری ، آئروتاکسی ( حرکت به سمت غلظت مناسب اکسیژن ) ، فتوتاکسی ( حرکت به سمت نور ) و

کموتاکسی ( حرکت به سمت مواد شیمیایی ) می شود.

ساختار فلاژل :

فلاژل از سه قسمت جسم پایه ، قلاب و رشته تشکیل شده است.

جسم پایه یا Basal Body  :

مجموعه ای از حلقه ها است که در گرم منفی ها 4 عدد و در گرم مثبت ها 2 عدد می باشد. به صورت حلقه های M، S  ، P ، L و حلقه های S ، P است. در گرم منفی ها جایگاه حلقه ها به  این صورت است که M غشای سیتوپلاسمی ، P روی پپتیدوگلیکان ، S فوق غشای سیتوپلاسمی و L بالای غشای خارجی قرار دارد.

در گرم مثبت ها این حلقه به این صورت است که حلقه های S  و P در فضای پری پلاسمی قرار دارند و باکتری های گرم مثبت فاقد حلقه های L و p هستند.

در سیتوپلاسم باکتری های متحرک حلقه ی C هم وجود دارد که از سیتوپلاسم منشا گرفته و نسبت به نمک و ph قلیایی حساس می باشد. این حلقه های سیتوپلاسمی هم در باکتری های گرم مثبت و هم در باکتری های گرم منفی دیده می شوند.

رشته یا Filament  :

قسمتی از تاژک که در خارج سلول قرار گرفته است و به وسیله ی غلافی احاطه شده است. رشته از پروتئین خاصی به نام فلاژلین تشکیل شده است که ترکیب پروتئین های تشکیل دهنده فلاژلین برحسب گونه باکتری متفاوت است ولی به طور کلی دارای صفات ثابتی نظیر فقدان سیستئین ، مقدار کم اسید های آمینه آروماتیک و مقدار بالای اسید های آمینه ی آسپارتیک و گلوتامیک می باشد.

قلاب یا Hook  :

قلاب ساختاری آستین مانندی است که در دیواره ی سلولی وارد شده است و رشته را به جسم پایه وصل می کنند. قلاب مقداری خمیدگی دارد و به صورت ساختمان مارپیچی و دارای الیاف درهم بافته پروتئینی است.

برای بررسی وجود فلاژل از روش های زیر استفاده می کنیم :

رنگ آمیزی ، میکروسکوپ دارک فیلد یا فاز کنتراست و قطره معلق یا Hangigng Drop    است.

موقعیت قرار گرفتن فلاژل در باکتری به شرح زیر است :

منوتریکس ( Monotrichious  ) :  از یک قطب باکتری خارج شده است مانند ویبریو کلرا ( عامل وبا ) .

آمفی تریکس ( Amphitrichious )  : دو تاژک از قطبین باکتری خارج می شود مانند کمپیلوباکتر.

لوفو تریکس ( Lophotrichious  ) : دسته ای از تاژک که از یک قطب باکتری خارج شده است مانند هلیکوباکتر پیلوری.

پری تریش ( Pretrichious  ) : سر تا سر باکتری از تاژک پوشیده شده است مانند پروتئوس.

رنگ آمیزی:

برای مشاهده تاژک به وسیله ی میکروسکوپ نوری باید رنگ آمیزی ویژه ی آن را انجام داد و رنگ آمیزی تاژک باکتری ها به علت نتایج متغیر بسیار معروف است و تلاش برای اجرای یک رنگ آمیزی تاژک مناسب در آزمایشگاه های شلوغ عموما موفقیت آمیز نبوده است.

از آنجایی که ، تاژک از قطر بسیار کمی برخوردار است سعی شده است که در تکنیک ها قطر تاژک را افزایش دهند ولی با وجود میکروسکوپ الکترونی مشاهده تاژک باکتری بسیار آسان شده است.

انواع رنگ آمیزی فلاژل یا تاژک :

فونتانا ، لیفسون ، گری و ریو می باشد.

در رنگ آمیزی فونتانا از نمک های اسید تانیک که به عنوان موردانت یا شانه زن و به منظور رسوب روی فلاژل و افزایش ضخامت آن استفاده می شود . هم چنین برای تهیه نمونه از باکتری پروتئوس میرابیلیس که از خانواده انتروباکتریاسه ها می باشد استفاده می شود. ( به علت داشتن فلاژل های پیرامونی و پری تریش و هم چنین چون دارای سوارمینگ (حرکت گروهی یا دسته جمعی باکتری ها که اساس آن داشتن تاژک در باکتری )  است. بنا بر این  روی محیط کشت باکتری فلاژل را جمع و به یک طرف حرکت می کند.

به همین خاطر جهت رنگ آمیزی باید ابتدا باکتری را به حالت ایستا در آوریم که فلاژل ها از هم باز شوند و بعد رنگ آمیزی را شروع می کنیم.

در روش رنگ آمیزی فونتانا از دو محلول A و B استفاده می کنیم. محلول A  یا محلول دندانه شامل آلومینیوم پتاسیم سولفات ، اسید تانیک ، کلروفریک  و محلول B شامل محلول نقره نیترات ، هیدروکسی آمونیوم است.

رنگ آمیزی فلاژل یا تاژک به روش فونتانا :

پتری دیش را کج کرده و سپس یک قطره آب به آن اضافه می کنیم. ( همچنان باید پلیت را کج نگه داریم تا در پایین ظرف جمع شود. ) سپس ظرف را درون آب مقطر ریخته و به مدت 10 دقیقه داخل انکوباتور قرار می دهیم.

یک قطره از نمونه مورد نظرمان را بر میداریم و روی لام تمیز قرار می دهیم و باید اجازه دهیم که طول لام را طی کند و سپس درون تشتک رنگ آمیزی قرار می دهیم تا نمونه کاملا خشک شود.

محلول A  را روی لام میریزیم وپس از 10 دقیقه لام را کج کرده و با آب مقطر می شوریم و سپس محلول B  را به نمونه اضافه کرده و پس از 10 دقیقه لام را می شوریم و خشک می کنیم. برای دیدن فلاژل مانند مشاهده ی بقیه ضمائم باید از عدسی 100 میکروسکوپ به همراه روغن ایمرسیون استفاده کنیم.

نتیجه رنگ آمیزی :

خود باکتری به رنگ قهوه ای تیره و تاژک باکتری به رنگ قهوه ای کم رنگ دور تا دور باکتری دیده می شود. به طور کلی لازمه ی مشاهده ی تاژک باکتری ضخیم کردن آن ها است. هرچه کار را ظریف تر انجام دهیم فلاژل بهتر دیده می شود و توجه شود که مشاهده تاژک با میکروسکوپ نوری فقط در صورتی که قطر آن افزایش پیدا کند امکان پذیر است ولی با میکروسکوپ الکترونی به راحتی قابل مشاهده است.

برای مشاهده ی تاژک از روش دیگری نیز استفاده می شود :

میکروسکوپ فاز کنتراست ، میکروسکوپ الکترونی EM  و میکروسکوپ زمینه تاریک است. البته روش دیگر استفاده از روش لام مرطوب یا قطره معلق است که یک قطره مایع حاوی باکتری را در بین لام و لامل قرار داده و با میکروسکوپ الکترونی EM  مشاهده می کنیم.

برای مشاهده ی حرکت در باکتری های بی هوازی از پیپت پاستور استفاده می کنند و مقداری از محیط کشت مایع بی هوازی را که حاوی باکتری است به درون آن کشیده و انتهای پیپت پاستور را به کمک شعله ملایم می بندند و سپس با میکروسکوپ الکترونی مشاهده می کنند.

برای اطلاع از  سایر محیط کشت های میکروبی  و همچنین قیمت محیط کشتها, لطفا مطلب محیط کشت کیولب را مطالعه نمایید.

برای بدست آوردن اطلاعات بیشتر در مورد قیمت محیط کشت  به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید.

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت ها ی میکروبی و سلولی با نازل ترین قیمت ها از معتبرترین کمپانی ها هستید

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: رنگ آمیزی فلاژل یا تاژک

اسپور شکل خفته باکتری شکلی مقاوم از یک باکتری است که در شرایطی مانند گرما ، کاهش رطوبت ، خشکی ، کمبود مواد غذایی ،برخورد با عوامل فیزیکی و شیمیایی پایدار می ماند, و به این شکل از باکتری اسپور یا اندوسپور ( زیرا در داخل سلول رویشی باکتری تشکیل می شود) می گویند.

هر باکتری فقط دارای یک اسپور است و هر اسپور فقط تبدیل به یک باکتری می شود. هم چنین محل تشکیل اسپور, محلی مشخص است که می توان از روی تشکیل محل آن , نوع باکتری را شناسایی کرد برای مثال :

• بعضی از باکتری ها در وسط اسپور دارند که به آن ها centeral   می گویند مانند  باسیلوس سرئوس.
• بعضی از باکتری ها نزدیک به انتها اسپور دارند که به آن ها subterminal می گویند مانند باسیلوس سوبتیلیس.
• بعضی از باکتری ها در انتها اسپور دارند که به آن ها terminal  می گویند. مانند کلستریدیوم تتانی.

اسپور(شکل خفته باکتری) به دو صورت اندوسپور و اگزوسپور وجود دارد. توجه شود که اسپور ها در تماس با محرک هایی مانند اسید آمینه و نوکلئوزید ها و گلوکز ،دوباره می توانند وارد مرحله ژرمیناسیون شوند. در ابتدا فیبریل های هسته ای پایدار می شوند و فعالیت متابولیک افزایش می یابد و در ادامه سنتز پروتئین ها و اجزای ساختمانی سلول های وژتاتیو شروع می شود و غشای هسته مرکزی اسپور به دیواره سلولی باکتری وژتاتیو تبدیل می گردد.

به فرایند تشکیل اسپور توسط باکتری های اسپور ساز اسپورلاسیون( معمولا 8 ساعت طول می کشد) وفرایند جوانه زدن اسپور تشکیل شده ، ژرمیناسیون که معمولا در 3 مرحله ( فعال سازی ، ژرمیناسیون و رشد به خارج )رخ می دهد ، گفته می شود.

توانایی تولید اسپور توانایی منحصر به فرد است که فقط در بعضی از باکتری ها وجود دارد. اسپور ها می توانند کروی( باسیلوس آنتراسیس)  یا بیضی( باسیلوس سوبتیلیس )  باشند و اندازه ی آن ها بین 2تا 4 میکرون است. ( اندازه اسپور می تواند هم اندازه و یا بزرگ تر از سلول رویشی باشد مانند اسپور کلستریدیوم تتانی که بزرگ تر از سلول رویشی است)

باکتری هایی که توانایی تولید اسپور را  دارند عبارت اند از :

باسیلوس ها ( مانند باسیلوس سرئوس و باسیلوس سوبتیلیس ) ، کلستردیوم  ها ( مانند کلستریدیوم پرفریژنز و کلستریدیوم بوتولونیوم ) ،اسپورسارسینا اورآ ، ترمو اکتینومایسز ها ، اسپورولاکتوباسیلوس ، اسپوروتوماکولوم ، اسپوروموسا و اسپوروهالوباکتر دو گونه مهم از نظربیماری زایی اسپور, باسیلوس (هوازی)و کلستردیوم (بی هوازی) است که بسیار حائز اهمیت هستند.

مانند کلستریدیوم بوتولینوم عامل مسمومیت غذایی ( بوتولیسم ) است و بسیار کشنده می باشد و یا کلستریدیوم پرفریجنس که عامل شانگرن بی علامت ( قانقاریا ی گازی ) و یا کلستردیوم تتانی که عامل کزاز یا تتانوس است.

به طوریکه در بیماری زایی همه ی این باکتری ها اسپور نقش دارد و بسیار سمی است. اسپور( اگزواسپور )  کلستریدیوم بوتولینوم قوی ترین اگزوتوکسین تولید شده است.

تفاوت اسپور(شکل خفته باکتری)با باکتری :

اسپور و باکتری در میزان کلسیم و آب با یکدیگر متفاوت هستند. باکتری ها حدود 77/5 درصد از وزنشان را آب تشکیل داده ولی اسپور تنها حدود 15 درصد آب دارد (خشک بودن اسپور به مقاومت آن نسبت به حرارت کمک می کند) و هم چنین اسپور دارای مقادیر زیادی کلسیم است.

اسپور را با میکروسکوپ الکترونی قابل مشاهده است و از داخل به خارج عبارت است از : جسم مرکزی ( core ) ، دیواره اسپور (spore wall  ) ، کورتکس ، پوشینه (coat  ) و اگزوسپوریوم

جسم مرکزی یا ( Core ) :

جسم مرکزی که به آن پروتوپلاست نیز می گویند حاوی ژنوم باکتری می باشد و همچنین تمام اجزای دستگاه سنتز پروتئین و سیستم تولید انرژی که بر مبنای گلیکولیز می باشد را شامل می شود.

در جسم مرکزی مقدار زیادی آمینو اسید  سیستئین وجود دارد که موجب مقاومت آن ها در برابر تشعشعات  می گردد. مقادیر زیادی پیکولینات کلسیم نیز در جسم مرکزی دیده می شود که علت مقاومت به گرما در اسپور ، بخشی به دلیل وضعیت آبگیری شده و بخشی به دلیل مقادیر بالای دی پیکولینات کلسیم  (DPA  ) است که واسطه ای در مسیر تولید آمینو اسید لیزین است.

دیواره اسپور یا (Spore wall) :

دیواره اسپور داخلی ترین لایه است که غشای درونی اسپور را می پوشاند و از جنس پپتیدوگلیکان است. دیواره اسپور در واقع لایه ای است که غشای پروتوپلاست اسپور احاطه می کند و هنگام تبدیل به فرم رویشی باکتری دیواره سلولی را می سازد.

کورتکس :

ضخیم ترین لایه پوشش اسپور است که ازجنس پپتیدوگلیکان غیر عادی که حاوی مقادیر زیادی دی پیکولینات کلسیم یا پریدین 2 و 6 دی کربوکسیلیک اسید ( ماده برداشت کننده ی کلسیم ) و پل های عرضی غیر طبیعی نظیر حلقه های مورامیک لاکتام است ولی به طور کلی میزان پپتیدوگلیکان کمی دارد.

کورتکس لایه ای ورقه ورقه است که در برابر آنزیم لیزوزیم به شدت حساس است. هم چنین دارای دی پیکولینات ( DPA ) است که از اختصاصات اسپور می باشد. توجه شود که وجود DAP  در کورتکس و هم چنین مقداری در سیتوپلاسم سبب آبگریزی از دیواره و سیتوپلاسم می گردد. دی پکولینات عامل برداشت کننده ی نمک کلسیم است که تا حدود 10 درصد وزن خشک اسپور را تشکیل می دهد.

پوشینه یا ( Coat ) :

ساختاری شبه کراتینی دارد ( آمینو اسید سیستئین و پیوند دی سولفیدی دارد) که سبب محافظت اسپور در برابر عوامل ضد باکتری و حتی اشعه UV می گردد. البته پوشینه به علت مقادیر زیاد پیوند سولفیدی نفوذ ناپذیر است و به همین خاطر مسئول مقاومت اسپور به مواد شیمیایی آنتی باکتریال است.

اگزوسپوریوم :

خارجی ترین لایه اسپور است که از پروتئین ، لیپید و کربوهیدرات تشکیل شده است. البته هنوز عملکرد دقیق اگزوسپوریوم مشخص نیست.

روش های رنگ آمیزی اسپور :

در مقاله رنگ آمیزی در باکتری شناسی ، توضیح داده شد که :

رنگ آمیزی یکی از کاربردی ترین و متداول ترین روش ها برای بررسی ساختار میکروارگانیسم است. مانند رنگ آمیزی گرم ( رنگ آمیزی افتراقی)  که برای تشخیص گرم مثبت یا منفی بودن باکتری هاکاربرد دارد.

  حال به بررسی رنگ آمیزی در اسپور می پردازیم.

• رنگ آمیزی اسپور و هم چنین رنگ زدایی از آن به راحتی ممکن نیست. با روش های مختلفی می توان اسپور را رنگ کرد :
• رنگ آمیزی به روش مولر
• رنگ آمیزی به روش مالاشیت گرین
• از رنگ آمیزی گرم نیز می توان برای رنگ آمیزی اسپور استفاده کرد به طوری که از فاز کنتراست میکروسکوپ نیز استفاده کرد.

رنگ آمیزی به روش مولر :

1. تهیه گسترش از کشت 24 تا 48 ساعته باسیلوس سوبتیلیس و یا باسیلوس سرئوس.
2. خشک کردن
3. فیکساسیون
4.  اضافه کردن کرومیک اسید پنج درصد به مدت 5 دقیقه به منظور افزایش نفوذپدیری اسپور به رنگ.
5.  اضافه نمودن فوشیل زیل به مدت 15 دقیقه توام با حرارت به گونه ای که رنگ نجوشد و فقط از روی آن بخار بلند شود.
6. رنگ بری با متانول
7.  اضافه نمودن متیلن بلو به مدت 1 تا 2 دقیقه

شستشو با آب و خشک نمودن در مجاورت هوا ، اضافه نمودن روغن ایمرسیون و مشاهده با لنز 100 نتیجه گیری که از رنگ آمیزی مولر به دست می آید : باکتری ها به شکل باسیل های آبی رنگ و اسپور به رنگ قرمز دیده می شود. 

رنگ آمیزی به روش مالاشیت گرین (فولتون _ شیفر) :

1 . تهیه گسترش از کشت 24 تا 48 ساعته باسیلوس سوبتیلیس یا باسیلوس سرئوس

2 . خشک کردن گسترش

3 . فیکساسیون

4 . اضافه کردن رنگ مالاشیت گرین بر روی حرارت به مدت 5 تا 19 دقیقه به گونه ای که رنگ نجوشد و فقط از روی آن بخار بلند شود و هر زمان که رنگ خشک شد به آن رنگ اضافه نمایید.

5 . شستشو با آب تا رنگ اضافه کاملا خارج شود .

6 .  اضافه نمودن رنگ سافرانین پنج درصد به مدت 2 تا 3 دقیقه ( سافرانین به عنوان رنگ مکمل است) .

7 . شتشو با آب و خشک نمودن در مجاورت هوا ، اضافه نمودن روغن ایمرسیون و مشاهده با لنز 100 . نتیجه گیری که از رنگ آمیزی مالاشیت گرین به دست می آید: باکتری های باسیلی شکل به رنگ قرمز و اسپور به رنگ سبز دیده می شود.

برای اطلاع از  سایر محیط کشت های میکروبی  و همچنین قیمت محیط کشتها, لطفا مطلب محیط کشت کیولب را مطالعه نمایید.

برای بدست آوردن اطلاعات بیشتر در مورد قیمت محیط کشت  به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید.

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت ها ی میکروبی و سلولی با نازل ترین قیمت ها از معتبرترین کمپانی ها هستید

برای خرید تجهیزات آزمایشگاهی هلدینگ KTG اعم از میکروسکوپ، اتوکلاو، انکوباتور ، آون آزمایشگاهی روی لینک ها کلیک کنید.

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: اسپور شکل خفته باکتری

واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR (Poly Chain Reaction روشی است که به محققان اجازه می دهد تا به سرعت، نسخه های یک منطقه خاص از مولکول DNA را در شرایط آزمایشگاهی تکثیر کنند.

برای اطلاع از قیمت دستگاه PCR مورد نظر به صفحه لیست قیمت شرکت سر بزنید. کمپانی Techne تولید کننده دستگاه های real time می باشد.

برای انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز یا PCR به چه چیزی نیاز دارید؟

• الگو (Template) یا قطعه خالص از دو رشته ای از DNA که می خواهید آن را کپی کنید.
• آغازگرها(Primers) یا مولکول های DNA مصنوعی کوتاه که یک دنباله DNA خاص را برای تکثیر هدف قرار می دهند.
• آنزیم تگ پلیمراز(Taq DNA Polymerase )
  این آنزیم یک آنزیم پلیمرازی است که از باکتری گرمادوست Thermus Aquaticus استخراج شده است.
• این باکتری در چشمه های آب گرم یافت می شود و بسیار مقاوم به گرما میباشد به همین علت آنزیم Taq بسیار مقاوم به حرارت است.
  آنزیم تگ در واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR به فراوانی مورد استفاده قرار می گیرد.
• برتری های آنزیم تگ پلیمراز K.T.G  :
  • دارای ویال جداگانه حاوی بافر 10X جهت بهبود عملکرد آنزیمی برای
  • درجه های بالای ساختارهای ثانویه و نقاط غنی از نوکلئوتیدهای G/C
  • دارای ویال جداگانه MgCl2
  •  مناسب برای T/A کلونینگ
  •  دارای مقاومت به مدت دوسال در دمای 20- درجه سانتیگراد
     
• نوکلئوتیدهای آزاد به عنوان واحد های ساختاری سازنده  DNA مورد استفاده آنزیم قرار گرفته و طویل سازی انجام می شود.
• ترموسایکلر(دستگاه PCR) یک دستگاه تخصصی است که به سرعت نمونه ها را گرم و سرد می کند.
• کاتیون های دو طرفیتی نظیر یون دوظرفیتی منیزیم .
• مسترمیکس آماده تگ 2X Taq Premix :
  مسترمیکس چیست؟
  مسترمیکس ، مخلوطی از مواد واکنش (آنزیم تگ- نوکلئوتیدهای آزاد-کاتیون های دو ظرفیتی منیزیم-بافر) بصورت آماده است
• که برای کاربر بهبود عملکرد را به همراه دارد.
• مسترمیکس تگ 2X Taq Premix شرکت K.T.G:
• مخلوطی از آنزیم Taq پلیمراز، dNTP ها، رنگ Loading Dye، بافر مخصوص، MgCl2 و تثبیت کننده پروتئین است که
• صرفا نیازمند پرایمرهای فروارد و ریورس و رشته DNA الگو می باشد.
• برتری های مسترمیکس K.T.G :
  • کاهش خطاهای فنی
  • عدم نیاز به اضافه نمودن رنگ Loading Dye به نمونه الکتروفورز
  • مقرون بصرفه

مکانیسم انجام PCR

برای انجام (PCR (Poly Chain Reaction ، الگو که همان مولکول DNA می باشد با پرایمرها، آنزیم Taq پلیمراز و نوکلئوتیدها مخلوط می شود. مخلوط واکنش تا دمای 94 درجه سانتیگراد به منظور واسرشتگی رشته DNA بالا می رود. (واسرشته سازی)

در مرحله بعد، دمای دستگاه تا 45 درجه سانتیگراد و 60 درجه سانتیگراد پایین می آید و به آغازگر یا همان پرایمر ها اجازه اتصال به ناحیه  مکمل خود بروی الگو را می دهد. ( اتصال)

در آخر، با افزایش دما تا 72 درجه سانتی گراد، دمای بهینه جهت شروع عملکرد آنزیم برای سنتز ایجاد می شود. ( طویل شدن) رشته DNA در هر سیکل PCR (واسرشته سازی ، اتصال، طویل شدن) دو برابر می شود. به منظور تولید DNA کافی برای تجزیه و تحلیل، ممکن است بیست تا چهل چرخه مورد نیاز باشد.

تجهیزات مرتبط

برای انجام این واکنش به وسایلی نظیر سمپلر، سر سمپلر کریستالی، میکروتیوب، تانک الکتروفورز، میکروفیوژ و ... مورد نیاز است.

در نهایت برای جداسازی و مشاهده  نتیجه PCR انجام شده و باندهای مورد نظر، از الکتروفورز افقی و ژل آگارز و ژل داک استفاده می شود.

به منظور داشتن مرجعی برای بررسی اندازه باندهای درون ژل، درون چاهک های ژل، در کنار نمونه های PCR ، یک نمونه مرجع یا همان Ladder لود می شود.

برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد الکتروفورز بروی کلمه کلیک کنید.

کاربرد واکنش زنجیره ای پلیمراز یا PCR   :

کاربردهای PCR شامل موارد زیر می باشد:

تشخیص پیش از تولد

تشخیص بیماری ها

تحقیقات جنایی

انگشت نگاری ژنتیک

تعیین توالی ژنومی

تعیین جنسیت جنین

تشخیص سرطان 

کلونینگ و ...

نکاتی که باید به آن توجه نمود:

برای اضافه کردن هر ماده به ویال واکنش از سر سمپلرهای جداگانه استفاده کنید. استوک یا منابع ذخیره مواد مورد استفاده را حتما در فریزر نگه داری کنید و هر چند وقت یکبار صحت آن ها را کنترل کنید.

قبل از استفاده از هر ماده، به منظور یکدست شدن ماده، از ورتکس استفاده کنید. نمونه های کنترل منفی و مثبت را در کنار نمونه های آزمایش، در ژل الکتروفورز RUN کنید.

انواع مختلف واکنش زنجیره ای پلیمراز یا PCR :

PCR چیست؟

انواع مختلف واکنش های PCR وجود دارد.

کاربران با توجه به نیاز خود، از PCR های مختلف استفاده می کنند.

در اینجا توضیح مختصری در مورد انواع مختلف PCR ارائه شده است.

انواع PCR:

1. RT-PCR : از این روش برای رونوشت برداری معکوس استفاده می شود. با استفاده از آنزیم ریورس ترنسکیپتاز، DNA به مولکول RNA تبدیل می شود. در ادامه با اضافه کردن مواد، تبدیل RNA به cDNA انجام می شود. می توانید از کیت های مخصوص ساخت cDNA استفاده نمایید.

cDNA Synthesis Kit کیت ساخت cDNA شرکت K.T.G:

cDNA چیست؟
فرآیند ساخت تک رشته DNA، از رشته RNA یا mRNA به عنوان الگو توسط

آنزیم رونوشت بردار معکوس (Reverse Transcriptase) را ساخت cDNA می نامند.
این کیت شامل:
محلول 2X RT-premix
محلول Enzyme Mix
10X Buffer

2. Ligation-mediated PCR : این PCR شبیه یک PCR کلاسیک می باشد و فقط یک مرحله استفاده از آنزیم لیگاز به آن اضافه شده است. از این روش برای توالی یابی ژنومی  و ... استفاده می شود. ابتدا یک لینکر یا آداپتور به مولکول DNA متصل می شود، سپس پرایمر یا آغازگرهای طراحی شده برای این توالی های لینکر، به فرآیند انجام واکنش اضافه شده و مراحل بعدی ادامه می یابد.

3. (Methylation-specific PCR ( MSP: این روش برای شناسایی الگوهای متیلاسیون مولکول DNA

در جزایر سیتوزین گوانین (CpG) در DNA ژنومی استفاده می شود.

4. Multiplex-PCR  : از چندین جفت آغازگر برای توالی هدف مختلف استفاده می کند.

5- Variable Number of Tandem Repeats (VNTR) PCR : برخی از توالی ها در مولکول DNA

به صورت توالی های پشت سر هم، تکرار می شوند. تعداد تکرار این توالی ها در یک آلل در افراد مختلف، متفاوت است.

این روش PCR برای شناسایی این مناطق، انجام می شود.

برای شناسایی والدین، انگشت نگاری و جرم مورد استفاده قرار می گیرد.

از انواع دیگر PCR می توان به موارد زیر اشاره کرد:

6. Asymmetric PCR :  این روش ترجیحاً یک رشته از DNA مورد هدف را تکثیر می کند.

7. Nested PCR : در این روش از دو سری پرایمر یا آغازگر استفاده می شود. محصول PCR اول، به عنوان الگو برای واکنش PCR دوم مورد استفاده قرار می گیرد. از این PCR برای افزایش اختصاصیت محصول تکثیر شده استفاده می شود.

8.Quantitative PCR : برای اندازه گیری مقدار مشخصی از DNA مورد نظر (یا RNA) در یک نمونه استفاده می شود.

9. Hot-start PCR : در این روش تمام مواد به ویال واکنش اضافه شده و در دستگاه تا دمای 95 درجه سانتی گراد، حرارت دهی می شوند.

قبل از شروع سیکل های بعدی، دستگاه را متوقف کرده و آنزیم پلی مراز به صورت دستی به مخلوط واکنش اضافه می گردد.

برای این واکنش می توانید از آنزیم Hot Start Taq DNA Polymerase شرکت K.T.G استفاده نمایید.

آنزیم هات استارت تگ پلیمراز چیست؟
این DNA پلیمراز، مخلوطی از Taq DNA پلیمراز و یک مهارکننده مبتنی بر آپتامر حساس به دما است. این مهارکننده به طور برگشت پذیر به آنزیم متصل می گردد و فعالیت آنزیم را در دمای پایین تر از 40درجه سانتیگراد مهار می کند.

برتری های آنزیم هات استارت K.T.G :

• کاهش پرایمر دایمر
• بی نیاز به زمان فعال سازی
• جلوگیری از تشکیل باندهای غیر اختصاصی
• پایدارتر از Taqهای هات استارت مبتنی بر آنتی بادی
• مقرون بصرفه تر از Taqهای هات استارت مبتنی بر آنتی بادی

10. Touchdown PCR : در این تکنیک ، درجه حرارت آنیل در چرخه های بعدی به تدریج کاهش می یابد. از این روش برای به دست آوردن دمای دقیق اتصال پرایمر به توالی DNA، استفاده می شود.

11. Assembly PCR یا PCA : از این روش برای اتصال الیگونوکلئوتیدهای دارای نواحی هم پوشان و ایجاد یک ژن کامل استفاده می شود.

12. Colony PCR : این تکنیک برای غربالگری وکتورهای باکتریایی نوترکیب و غیر نوترکیب مورد استفاده قرار می گیرد.

13. Digital PCR  یا dPCR : برای اندازه گیری مقدار دقیق DNA و یا RNA مشابه Real-time PCR مورد استفاده قرار می گیرد

ولی برخلاف Real-time به آنالیز منحنی ها نیازی ندارد.

برای کسب اطلاع از قیمت انواع دستگاه های PCR موجود در هلدینگ KTG به صفحه لیست قیمت پی سی آر مراجعه کنید.

همچنین می توانید جهت خرید دستگاه PCR با کارشناسان ما در تماس باشید.

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR

ابزارهای سنجش آزمایشگاهی جز دسته تجهیزات آزمایشگاهی قرار می گیرند که برای عملکرد دقیق و به دست آمدن نتایج درست با دقت بالا مورد استفاده قرار می گیرند. برخی از ابزارها نسبت به سایر تجهیزات کاربرد بیشتری دارند که ما در این مطلب قصد داریم چند مورد از مهم ترین ان ها را به شما معرفی کنیم.

انواع ابزارهای سنجش آزمایشگاهی

از ابزارهای سنجشی که در آزمایشگاه ها استفاده می شود، می تون به موارد زیر اشاره کرد:

دماسنج

دماسنج که به آن ترمومتر هم می گویند یکی از ابزارهای آزمایشگاهی است که برای اندازه گیری دمای مایعات و همچنین گازهای مختلف در زمان حرارت و گرما و یا انجام واکنش های شیمیایی مورد استفاده قرار می گیرد. در واقع دماسنج بر مبنای واحدهای مختلف می تواند دما را اندازه بگیرد. این ابزار یکی از حساس ترین ابزارهای آزمایشگاهی است که برای تعیین دما و حرارت کاربرد دارد و می تواند در نتایج آزمایش موثر واقع شود. این وسیله انواع مختلفی دارد که شامل دماسنج های گازی، الکلی، شیشه ای، جیوه ای، لیزری، دیال، ترموکویل، دیجیتالی، بخار هلیومی و غیره می شود اما نوع جیوه ای دماسنج ها بیشترین کاربرد را در آزمایشگاه های شیمی دارد.

الکل سنج آزمایشگاهی

یکی دیگر از ابزارهای سنجش آزمایشگاهی الکل سنج است که همان طور که از نام آن پیدا است برای تعیین درصد الکل در مایع آب و یا یک الکل برای اندازه گیری مورد استفاده قرار می گیرد. اگر مایع مورد نظر دارای قند باشد، این ابزار نمی تواند نتیجه دقیقی را اعلام کند.

آب سنج آزمایشگاهی

آب سنج که به آن هیدرومتر هم می گویند برای اندازه گیری وزن مخصوص یا چگالی نسبی آب به کار می رود. عملکرد این ابزار براساس قانون ارشمیدس است. معمولا آب سنج را از شیشه می سازند.

شوری سنج آزمایشگاهی

از دستگاه شوری سنج آزمایشگاهی  برای اندازه گرفتن و تعیین میزان شوری در محلول ها یا محتواهایی که در آن نمک حل شده استفاده می کنند.

کرنومتر آزمایشگاهی

کرنومتر هم که با نام زمان سنج یا تایمر آزمایشگاهی شاخته می شود، یک قطعه ساعتی است که می تواند زمان را از هنگام فعال شدن یک واکنش، فرآیند یا عمل تا زمان غیر فعال شدن آن را اندازه بگیرد. از این ابزار سنجش بیشتر برای سنجش سرعت واکنش های شیمیایی استفاده می شود. کرنومتر آزمایشگاهی به دو شکل کرنومتر مکانیکی یا عقربه ای و کرنومتر الکتریکی دیجیتالی قابل تهیه است.

کولیس آزمایشگاهی

یکی دیگر از ابزارهای سنجش آزمایشگاهی کولیس است که می تواند فاصله میان دو طرف مختلف یک جسم را اندازه گیری کند. این ابزار انواع مختلفی دارد که شامل کولیس ورنیه، کولیس عقربه ای، کولیس دیجیتالی یا رقمی و کولیس ریزسنج می باشد.

مولتی متر آزمایشگاهی

مولتی متر از جمله ابزارهای چند کاربره است. از این ابزار سنجش برای اندازه گیری کمیت های مختلف الکتریکی مانند ولتاژ، مقاومت الکتریکی، ظرفیت خازنی، جریان الکتریکی و غیره استفاده می شود. علاوه بر همه این موارد می توان با کمک مولتی متر سلامت و یا مشخصات یک قطعه الکتریکی یا قطعه الکترونیکی را هم مشخص و بررسی کرد.

میکرومتر آزمایشگاهی

میکرومتر ابزاری است که دقت بالایی برای اندازه گیری قطر داخلی، قطر خارجی، ورق ها، ارتفاع یکی شی، اندازه گیری قطر اجسامی همچون قطر میله، سیم، پیچ، چرخ دنده، تیغه فرز، مته و غیره کاربرد دارد. میکرومترها به دو دسته میکرومتر اینچی و میکرومتر میلی متری دسته بندی می شوند. دقت اندازه گیری این ابزار بسیار بیشتر از ابزار کولیس است.

نمونه بردار آزمایشگاهی

نمونه بردار که با نام سمپلر، میکروپیپت و پیپتور هم شناخته می شود، برای نمونه برداری، انتقال و جابجایی حجم های کم نمونه با دقت بالا استفاده می شود. البته ظرفیت این ابزار تنها 5 تا 100 میکرو لیتر است.

کاغذ PH

این کاغذ بیشتر برای اندازه گیری میزان اسیدی یا قلیایی بودن یک محلول استفاده می شود. روی بدنه این کاغذها رنگ هایی که وجود دارند که هر یک از آن ها معرف یک نوع ph می باشند. در پشت بسته کاغذ PH یک راهنمای تعیین PH وجود دارد که با استفاده از آن می توانید متوجه اسیدی یا قلیایی بودن محلول خود شوید.

نتیجه گیری

ما در این مطلب در مورد ابزارهای سنجش آزمایشگاهی صحبت کردیم و مهم ترین این ابزارها را به شما معرفی کردیم. این ابزارها هر کدام برای اندازه گیری های خاصی مورد استفاده قرار می گیرند و می توانند باعث ایجاد نتیجه درست و دقیق در یک آزمایش شوند. برای خرید هر یک از این ابزارها می توانید وارد سایت شوید و با کارشناسان فروش ما در ارتباط باشید.

منبع: هلدینگ KTG

مقاله : ابزارهای سنجش آزمایشگاهی چیست؟